背景：

在生产O-糖基化生物药物的过程中，由于核心GalNAc残基的不完全加工，可能会出现 Tn抗原（GalNAc以α连接的方式链接在丝氨酸/苏氨酸上），有研究指出，Tn抗原可参与 C型凝集素巨噬细胞半乳糖凝集素（MGL）结合，且MGL在树突细胞和巨噬细胞中表达， 因此Tn抗原与MGL的链接可能引起免疫抑制，帮助肿瘤实现免疫逃逸。α-N-Acetylgalactosaminidase（exo-α-N-Acetylgalactosaminidase，α-NAGA，EC3.2.1.49）是一种高度特异性的外糖苷酶，可有效水解与糖蛋白（Tn 抗原）中丝氨酸或苏氨酸残基连接的 α-N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），该酶还对 α1-3 连接的末端 GalNAcs 显示活性。 因此 α-N-Acetylgalactosaminidase 可用于去除 Tn 抗原。

概述：

α-N-Acetylgalactosaminidase广泛分布于生物体内，参与糖缀合物的代谢。α-NAGA在天然条件下水解糖蛋白上的GalNAc。适用pH值范围6.0到7.6，不需要辅助因子或特殊缓冲体系。

产品包装：

Rhinogen^® α-N-Acetylgalactosaminidase包装规格如下：

配套试剂：

Rhinogen^® α-N-Acetylgalactosaminidase提供的试剂如下：

可消化至多 2mg O-糖蛋白。

产品冻干于 20mM TBS，pH7.6 中，不添加防腐剂。

产品来源:

Rhinogen^® α-N-Acetylgalactosaminidase 重组表达于 E. coli，理论分子量约 52KD，C 端 带 6×His 标签。

产品质量：

SDS-PAGE分析，纯度≥95%；没有检测到污染的外切糖苷酶、糖苷内切酶及蛋白酶活性。

产品特性：

α-N-Acetylgalactosaminidase（α-N-乙酰半乳糖苷酶）是一种高度特异性的糖苷外切酶， 可有效水解与糖蛋白中丝氨酸或苏氨酸残基连接的α-N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）（Tn 抗原），该酶还对α 1-3连接的末端GalNAc显示活性。α-NAGA在天然条件下水解糖蛋白上的GalNAc。适用pH值范围6.0到7.6，不需要辅助因子或特殊缓冲体系。

酶活定义：

α-N-Acetylgalactosaminidase能从4-Nitrophenyl N-acetyl-alpha -D-galactosaminide中裂解 α-N-乙酰基半乳糖胺基，通过402nm检测释放PNP的量来定义酶活，在所述条件下（20mM Tris，pH6.8）每个活力单位每分钟能释放≥600pmol PNP。

保藏条件：

1. 采用冰袋运输，长期储存请置于-20℃，重悬后2-8℃可保存1个月。

2. 避免反复多次冻融和频繁的温度变化。

应用：

1. 从糖肽及糖蛋白上释放完整的Tn抗原；

2. 对 O-糖基化生物药物进行 Tn 抗原表征；

3. 表征蛋白质是否糖基化及去糖基化；

4. 糖蛋白测序及分析；

5. 糖蛋白重组表达。

特性：

α-N-Acetylgalactosaminidase 在生理缓冲液和中性 pH 值中具有活性，使其与大多数样品兼容。此外，α-N-Acetylgalactosaminidase 的活性不依赖于可能损害 LC-MS 分析的任何辅助因子，例如 BSA。根据糖蛋白底物的性质，孵育时间为 2~18h。

实验准备：

配制反应缓冲液（20mM Tris，pH6.8）：将10×Glyco 缓冲液3稀释至1×。

使用反应缓冲液将糖蛋白底物调整至0.5-5.0mg/ml。

糖蛋白消化：

以2000U/支产品为例：

1、使用100μl ddH2O重悬冻干粉至20U/μl；

2、以1U α-N-乙酰半乳糖苷酶/1μg糖蛋白的比例添加α-N-Acetylgalactosaminidase；

3、37℃孵育2-18h。

注意：根据底物类型适当优化酶的浓度和孵育时间。

注意事项：

1. 避免反复冻融。

2. 可适当分装以减少多次冻融带来的活性损失。

3. 本产品仅供研究使用，不适用于人或动的物诊断及治疗用途。