纳米抗体（VHHs）因其可通过工程改造直接在真核细胞和原核细胞中进行表达而成为有吸引力的抗体形式。利用噬菌体展示技术构建的免疫羊驼VHH库，并从中筛选得到抗Fc VHHs，它们可以与人类抗体Fc段高亲和力地结合。当用于标记产生mAb的CHO细胞时，GFP融合的anti-human Fc VHH-GFP产生的FACS信号明显强于AF488连接的抗IgG抗体。此外，基于抗Fc VHH-GFP标记的CHO细胞的分选使高生产力的细胞系得以富集。相比传统的动物来源荧光抗体，这种安全且具有成本效益的抗Fc VHH-GFP可用于优化治疗性mAb生产的高产细胞系的筛选过程。
高产细胞系的筛选和富集仍然是单克隆抗体（mAb）生产过程中面临的巨大挑战。传统的有限稀释法是成熟和可靠的，但它耗时长，而且通量低。因此，一种高效和高通量的筛选方法就更加重要了。近年来，随着技术的发展，新型的单细胞筛选方法已经被开发出来，以促进更有效地分离高产的克隆细胞，如单细胞分析和分离系统，包括：
1）基于细胞表面显示技术的无标签筛选方法，微流控技术和Beacon平台；
2）利用ClonePix™ Systems分析生长在半固体中的细胞，并通过克隆荧光显微镜进行挑选。
研究结果表明，分泌的蛋白质会被短暂截留在细胞表面，并且与细胞分泌的蛋白质的量相关，这为使用流式细胞仪和细胞分选来分离出稀有的高产细胞提供了启发。荧光激活细胞分选（FACS）根据测定的荧光水平对细胞进行筛选，已被证明是高效且有效的。然而，在筛选过程中使用的抗IgG荧光抗体来自于动物源，导致人们对生物制药生产中的生物安全性产生担忧。因此，寻求一种重组抗体用于细胞标记，并从转染的细胞系中选择高产的亚克隆，显得尤为重要。研究表明，单链可变片段（scFv）和绿色荧光蛋白（GFP）的融合抗体可以在流式细胞仪中直接标记细胞，避免了抗原结合能力的丧失，减少了背景染色。与scFv相比，VHH在结构稳定性、分子量、表达产量、DNA操作和文库构建的便利性方面具有更多优势。
利用VHH-GFP筛选出可高表达抗Her2 mAb的重组CHO细胞系。通过噬菌体展示技术筛选出抗Fc的VHH，以GFP融合标签的形式在大肠杆菌中进行表达和生产。纯化后的VHH-GFP可用来标记CHO细胞，并以荧光强度为标准分离出高产细胞系。最后，检测不同亚克隆中抗Her2 mAb的表达水平。通过与传统的荧光抗体（Goat anti-human IgG(H+L) antibody, Alexa Fluor 488）的对比，评估VHH-GFP在分选高产细胞系的可行性。
用F. sight分别对VHH-1-GFP或AF488标记的细胞进行分选。VHH-1-GFP标记（图1，B）的细胞系的荧光强度明显高于AF488标记的传统抗体（图1A）的荧光强度。单个细胞系的荧光值对比展示在图1C。
在分选过程中，设置条件包括荧光强度最高的30%的细胞，并且大于12微米，圆度为0.6∼1，以排除不能增殖的和不规则形状的细胞。随后将分选的细胞置于96孔板中培养（1个细胞/孔），20天后通过ForteBio定量分析抗Her2 mAb的表达情况。经VHH-1-GFP分选的亚克隆的平均mAb浓度为15.75 mg/L，最高值为28 mg/L，而经AF488共轭山羊抗体筛选的亚克隆的平均值为9.14 mg/L，最高值为17.8 mg/L（图2）。这些数据证实了VHH-1-GFP可用于流式细胞仪分选，并有效富集高mAb表达的CHO细胞。
瑞诺生物提供Rhinogen®重组抗人IgG（Fc）纳米抗体- Fluorescein标签，可特异性识别4种人IgG并具有超高亲和力，其中Fluorescein标签可由480nm激光激发，并在510nm发射。可用于流式细胞分析（Flow）、免疫荧光（IF）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组化（IHC）等，特别的可配合流式细胞分选仪、ClonePix™ Systems、F.sight™单细胞筛选仪用于高表达IgG克隆筛选，在短时间得到大量高表达克隆。
货号
产品名称
规格
1mL
产品特点：
邮箱：sales@rhinobio.com
电话：18912791908